蒙娜丽莎的微笑指的是迷人的微笑或神秘的微笑。
《蒙娜丽莎》这幅画中，最给人神秘的就是它的微笑，在直视蒙娜丽莎的嘴巴时，会觉得她没怎么笑，然而当看她的眼睛和脸颊阴影时，又觉得她在微笑，所以有研究人员利用微表情得出，蒙娜丽莎的微笑中含有83%的高兴，9%的厌恶，6%的恐惧，2%的愤怒。
《蒙娜丽莎》是意大利文艺复兴时期画家列昂纳多·达芬奇创作的油画，现在收藏于法国卢浮宫博物馆。这幅画主要表现了女性的典雅和恬静的典型形象，塑造资本主义上升时期一位城市有产阶级的妇女形象。其代表了文艺复兴时期的美学方向。
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